急性脊髓损伤(ASCI)小鼠模型的建模方法

模式动物品系：SPF级ICR小鼠，健康，雄性，8~12W

实验分组：

实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期：4-6 weeks

建模方法：

1、取 ICR 小鼠，戊Ba比妥钠麻醉后，采用椎板切除术暴露 T9-T10 处脊髓。然后采用脊髓打击器，于暴 露脊髓处施加 90 kilodynes 的力造成挫伤型脊髓损伤，SCI 后连续 10 天每天肌肉注射庆大霉素 （8mg/kg）防止术后感染，并每天两次人工膀胱按压挤尿直至恢复自主膀胱活动为止（防止尿潴留）。 2、处理一周后进行 BBB 评分评估小鼠后肢运动能力；

3、BBB score=0 时，则模型构建成功。将构模成功的小鼠分为两组，每组 8只，于挫伤型 SCI 处理 1week 后，于大鼠尾静脉处进行注射处理（模型组只注射生理盐水，治疗组注射含有受试药物的生理盐水 ）。

4、SCI 后，16 只小鼠饲养 3week 时，根据SCI后 3 week 结果每组取 3 只效果最显著的小鼠取脊髓进行 病理学检测，剩余 10 只小鼠继续饲养并与5week，7week，9week进行BBB 评分和机械触诱发痛检测。 SCI后 9week 时所有受损脊髓中心进行冻存或 OCT 包埋。

模型评价

1. BBB test

于药物注射后每隔一周进行 BBB test，直至移植后 8 周（即 SCI 后 3week、5week、7week、9week）。 药物注射后 2 周（即 SCI 后 3week）共 16 只小鼠进行行为学检测数据，选择变化显著的 3 只小鼠（每组 3 只，即 6 只小鼠）的脊髓组织进行病理学检测。 剩余 5 只小鼠（每组 5 只，即 10 只小鼠）依旧隔一周（即 SCI 后 5week、7week、9week）进行 BBB test。分值范围为0-21分，其中0分代表后肢完全失去运动功能，21分代表后肢运动功能基本正常。

2. Mechanical allodynia test （机械触诱发痛检测）

使用 Von Frey 测痛套件，记录缩足的压力（g），2 分钟时间间隔内测量 4 次，剔除最大值和最小值后获 取的中间值作为痛阈（g）。

脊髓损伤模型的建立及术后小鼠情况：

所有实验小鼠在打击时均出现痉挛性摆尾，双下肢及躯体回缩扑动，随后双下肢瘫痪，损伤节段脊髓硬膜 完整、出血、水肿。所有麻醉后小鼠于术后苏醒，出现双下肢瘫痪，运动、感觉功能丧失，依靠双上肢移 动躯体，头颈部活动正常。术后1d，所有小鼠BBB评分均小于1分，活动明显减少，进食、饮水量减少， 协助排尿7d后大部分小鼠恢复自主排尿功能。 机械触诱发痛检测： 将小鼠置于金属网格的架子上使之适应环境，采用Von Frey丝自足底下方垂直剌激后爪底皮肤表面，能引 起阳性缩爪反应所需的最低力度记为缩爪阈值，造模后小鼠的PWTs值较正常小鼠均下降。

组织病理学

3.免疫荧光

药物注射后两周，取受损脊髓组织，石蜡切片后，检测其中 MAP-1 的表达分布，

4.小胶质细胞/巨噬细胞检测- 激光共聚焦

药物注射后两周，取受损脊髓组织，石蜡切片后，检测其中 ED1(小胶质细胞/巨噬细胞活化marker)。

需确认的信息

1. 模型种属（大鼠还是小鼠或是其他种属）

2. 动物体重有无要求，年龄有无要求

3. 雌雄有无要求

4. 模型构建具体方案

5. 取材要求（采血、取组织样本）