小鼠白细胞介素-2 ELISA 试剂盒
产品编号：SEKM-0004
适用于小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本

背景介绍：

白细胞介素 2（IL-2）是一种在机体免疫应答中扮演重要角色的多效性细胞因子。其于
1976 年被 Morgan 在小鼠脾细胞培养上清中发现，由于它能很好地促进和维持 T 细胞长期培
养, 故将其称之为为 T 细胞生长因子，1979 年统一命名为 IL-2。小鼠 IL-2 含有 133 个氨基
酸残基，分子量为 15.5kDa。IL-2 最重要的作用是诱导 T 淋巴细胞增殖和分化，此外，IL-2
还可调节多种细胞的免疫应答。在体内，IL-2 有抗肿瘤、抗微生物感染、引起移植排斥和自
身免疫以及免疫调节等作用。 
检测原理： 
Solarbio (Solarbio ®)ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将
抗小鼠 IL-2 单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标
准品和样本中的小鼠 IL-2 会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗小鼠
IL-2 抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的小鼠 IL-2 发生特异性结合；
洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度
的非共价结合；洗板后加入显色剂底物 TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的小鼠 IL-2，
则 HRP 会使无色 TMB 变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成
黄色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的
小鼠 IL-2 浓度与 OD 成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中小鼠
IL-2 的浓度。
 原理图：

注意事项：※※※
 1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
 2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
 3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。 
 4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。
 5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。.
 6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶
盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请
用移液器小心吹打几次。
 7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试
剂代替本试剂盒中的某单个组分。
 8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。


 安全提示：
试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作人员在使用时请带上手套并注意防护；在操
作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛，如果不慎接触，请用大量清水清洗；检测血液样本
及其它体液样本时，请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。 


试剂盒组成及储存：



自备实验器材（不提供，可代购） 
1． 酶标仪（主波长 450nm，参考波长 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl 
3． 洗板机或洗瓶 
4． 37℃孵育箱 
5． 双蒸水，去离子水，量筒等 
6． 稀释用聚丙烯试管 

样本收集及储存：
1. 细胞培养上清：
将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装
于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。 
2. 血清样本：
室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装
于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，
请再次离心，避免反复冻融。
3. 血浆样本：
将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作
为抗凝剂，混合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小
EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。 

※注意：
血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结果；如果样本中的靶标
物检测浓度高于标准品的最高值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实
验以确定稀释倍数。 

试剂准备： 
1. 试剂回温：首先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现
结晶，请放入 37℃温浴直到结晶全部溶解。 
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将 20 倍
浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。 
3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1ml至冻干标准品中，静置15分钟待
其完全溶解后轻轻混匀(浓度为1000pg/ml)，然后按照以下浓度：1000、 500、 250、125、
62.5、31.25、15.625、 0 pg/ml进行稀释。复溶过的标准品原液（1000pg/ml）未用完的
应废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～-80℃冰箱，具体如下图。



4. 生物素化抗体工作液：预先计算好试验所需用量，用检测稀释液（SR2）将100倍抗体浓
缩液稀释成1倍应用工作液（稀释前充分混匀），请在30分钟内加入到反应孔中。 


生物素化抗体工作液具体稀释方法如下：



5. 酶结合物工作液：按每次试验所需用量配制，用酶结合物稀释液（SR3）将100倍浓缩酶
结合物稀释成1倍应用工作液（稀释前离心），请在30分钟内使用。


 酶结合物工作液具体稀释方法如下：



6. 洗涤方法：
 自动洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，注入洗涤液为 300ul/
孔,注与吸出间隔为 30 秒，洗板 5 次。
 手工洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，用洗瓶加入洗涤液
300ul/孔，静止 30 秒后甩净酶标板孔中液体，在厚迭的吸水纸上拍干，洗板 5 次。 


检测步骤：


结果判断： 

1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测，参考波长为 630 nm。如不能进行
双波长检测，请用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。
 2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值 
3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中IL-2含量可
通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。 
4.若标本 OD 值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。 


参数表征：

 1. 数据及标准曲线


2. 灵敏度： 
最低可检测小鼠 IL-2 浓度达 7pg/ml，
20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差，计算相应的可检测浓度。
3. 特异性：
 不与小鼠 IL-2、4、6、8、10 反应，大鼠 IL-2、4、6、8 等反应
4. 重复性： 
板内，板间变异系数<10%
5. 回收率：
在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠 IL-2，计算回收率。
5. 回收率： 
在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠 IL-2，计算回收率。

6. 线性稀释：
分别在选取的 4 份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 IL-2，在标准曲线动力
学范围内进行稀释，评估线性。



常见问题及解决方法：