总黄曲霉毒素酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
1 使用目的：本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿样中总黄曲霉毒素残留的定量检测。
2 实验原理
本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有总黄曲霉毒素偶联抗原，加入总黄曲霉毒素标准品或样品，游离总黄曲霉毒素与微孔条上预包被的总黄曲霉毒素偶联抗原互相竞争抗总黄曲霉毒素抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中总黄曲霉毒素含量成反比，通过标准曲线计算样品中总黄曲霉毒素的含量。  
3 试剂盒组成 
3.1 预包被的总黄曲霉毒素偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2 总黄曲霉毒素标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是： 0 ng/ml，0.5 ng/ml,2 ng/ml,20 ng/ml,200 ng/ml,400 ng/ml。
3.3抗总黄曲霉毒素抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
3.4显色液A：1瓶（6ml）。
3.5显色液B：1瓶（6ml）。
3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7样本稀释液：1瓶（10×,  6ml），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9说明书一份。

4 需要而未提供的材料
4.1 设备
4.1.1波长450nm酶标仪。 
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。
6.4 标准品中含有总黄曲霉毒素，使用时应特别注意，操作时应带手套。
6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。
6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。
6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果
6.9 混合试剂时应避免起泡。
7 工作液准备
7.1总黄曲霉毒素标准品溶液：0 ng/ml，0.5 ng/ml,2 ng/ml,20 ng/ml,200 ng/ml,400 ng/ml
7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用
7.3 样本稀释液：已备用
7.3 显色剂：已备用，避免光线直照
7.4 反应终止液：已备用
8 样品处理：（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）
一般样品处理
8.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman No 1滤纸过滤
8.4取100µl处理后的样品，加入400µl样本稀释液
8.5取100μl稀释液进行分析
动物组织前处理
8.6准确称取1±0.05 g匀浆后的组织样品到50 ml的聚苯乙烯离心管中；加入3ml乙*--丙酮提取溶液，2000rpm剧烈震荡20s后4000r/min以上离心5min
8.7取上清液0.8ml在50℃氮气流下吹干
8.8加入3.2mL样品稀释液, 750rpm涡旋20s
8.9取100ml用于分析  
饲料前处理方法
8.10准确称取1±0.05 g粉碎饲料样品到50 ml的聚苯乙烯离心管中；加入4ml乙*，1ml丙酮，2000rpm剧烈震荡20s后4000r/min以上离心3min
8.11取上清液0.7ml在50℃氮气流下吹干
8.12加入2.8mL样品稀释液,涡旋20s，混匀后取100ml用于分析
牛奶前处理方法
8.13取1 ml牛奶样品到5 ml聚苯乙烯离心管中；加入4ml样品稀释液，混匀后取100mTUNEology 波长可调检测卡盒-->