热敏磷酸酶

产品及特点

本产品是从南极微生物中克隆并在大肠杆菌中表达的热敏磷酸酶，它能催化除去 DNA 或 RNA 末端的5′磷酸基团。由于磷酸酶处理后的 DNA 片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端，因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。

具体有下列特点：

1. 除去 DNA、RNA、rNTPs 和 dNTPs 5 末端的磷酸基团

2. 防止克隆载体的自连接

3. 蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化

4. 为 5 末端标记准备模板

5. 去除 PCR 产物中的 dNTP 和焦磷酸盐

6. 65℃ 加热 5 分钟可使酶完全失活

活性单位定义

1 单位指在 37℃ 条件下，30 分钟能使1 μg 经 HindIII (产生 5 突出末端) 、EcoRV (产生平齐末端) 或 PstI (产生 5 凹陷末端) 消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 > 95% 的 DNA 再环化 (通过转化 E. coli 细胞来检测) 。

反应条件

1× 热敏磷酸酶反应缓冲液 [50 mM Bis Tris-丙烷 HCl，1 mM MgCl2，0.1 mM ZnCl2 (pH 6.0 @25℃)]。37℃ 温育。热失活

65℃ 5分钟。

参考文献

(1) Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning:A Laboratory Manual, (2nd ed.), (p. 5.72). Cold Spring Harbor: ColdSpring Harbor Laboratory Press.

(2) Rina, M. et al. (2000) Eur. J. Biochem., 267, 1230–1238.

(3) Guthrie, E., unpublished observations.