N端测序（N-terminal sequencing）是解析蛋白质一级结构的常用手段，广泛应用于蛋白质组学、生物医药及结构生物学研究。高效、精准的测序不仅能揭示蛋白质的翻译起始、加工修饰及降解模式，还能提高生物制药质量控制的准确性。为了最大化测序效率，需要在实验设计、样本处理、测序方法选择和数据分析等多个环节进行优化。

一、样本优化：确保测序起点的可靠性

1、蛋白纯度提升

• 使用高效液相色谱（HPLC）、亲和层析或离子交换层析纯化蛋白，确保样品高纯度。
• 降低非特异性蛋白污染，减少背景噪音对N端测序结果的影响。

2、N端封闭检测与处理

• 使用质谱检测N端是否存在乙酰化、甲基化或糖基化等修饰。
• 采用化学处理或特定酶（如乙酰酯酶）去除N端封闭修饰，使蛋白适用于测序。

3、固定化策略

• 采用PVDF膜、玻璃纤维等基质固定蛋白，提高降解反应的稳定性。
• 避免蛋白降解或流失，提高序列解析的可靠性。

二、选择合适的N端测序方法

1、艾德曼降解法：精准直接的氨基酸序列解析

• 适用于纯化蛋白，可直接读取N端氨基酸序列。
• 适合低通量研究，分析封闭N端蛋白时需额外化学或酶解处理。

2、质谱法：高通量N端序列鉴定

• 适用于复杂蛋白混合物，可结合LC-MS/MS快速解析N端序列。
• 可同时分析N端修饰情况，提高修饰识别能力。

3、混合策略：结合多方法提升测序成功率

• 结合艾德曼降解和质谱方法，增强序列解析深度。
• 采用双酶解策略，增加N端肽段的覆盖度，提高数据可靠性。

三、优化反应条件，提高N端测序效率

1、艾德曼降解优化

• 使用高纯度苯异硫氰酸（PITC）和有机溶剂，减少副反应。
• 维持适当温度和pH，增强反应效率，提高降解产物的回收率。

2、酶解策略优化

• 选择合适的蛋白酶（如胰蛋白酶、Asp-N、Glu-C），确保N端肽段适合测序。
• 采用双酶解法，提高N端序列解析的覆盖率。

四、数据分析与质量控制

1、高效液相色谱（HPLC）优化

• 采用最佳流动相和梯度洗脱条件，提高PTH-氨基酸的分离度。
• 选择高灵敏度检测器（如荧光检测或UV检测），增强信号质量。

2、质谱数据解析

• 结合蛋白质数据库（如Uniprot、NCBI）进行匹配，提高序列鉴定准确性。
• 采用序列拼接算法，提高碎片离子数据的可靠性。

3、标准品与对照实验

• 进行标准蛋白的测序对照实验，验证仪器和方法的稳定性。
• 采用不同批次样品进行重复实验，确保数据可重复性。

五、结合多组学策略，拓展N端测序应用

1、结合转录组学解析翻译调控

• 比较mRNA与蛋白N端序列差异，研究翻译起始调控机制。
• 解析非常规翻译产物，如内部起始翻译和核糖体滑移事件。

2、探索蛋白降解路径

• 通过N端测序分析蛋白降解起始位点，研究泛素-蛋白酶体降解机制。
• 解析N端法则（N-end Rule Pathway），揭示不同蛋白降解速率的调控机制。

3、优化生物制药质量控制

• 验证重组蛋白N端序列，确保生物制药产品的正确性。
• 监测蛋白产品的降解模式，提高生物制药一致性。

N端测序是一项精准的蛋白质解析技术，通过优化实验设计、选择合适的测序方法、调整反应条件及结合多组学分析，可大幅提升蛋白质研究的效率和准确性。合理利用该技术能提供关键的生物信息，为蛋白质组学和精准医学研究提供支持。百泰派克生物科技提供全面的蛋白N端序列分析服务，欢迎联系我们！

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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