Anti-Flag亲和纯化凝胶
——IP/蛋白纯化好帮手
1产品概述
Anti-Flag亲和纯化凝胶（Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel），主要用于带有Flag标签的融合蛋白免疫沉淀（IP）和纯化，其核心组分是抗体与凝胶组成的吸附剂。本产品选用高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体，通过供价偶联的方式与Sepharose 4B gel形成紧密联系的吸附剂，能够特异性吸附Flag蛋白序列，得到高纯度的Flag标签蛋白。
« 目的蛋白载量高：载量≥1.1mg蛋白/mL凝胶
« 结合蛋白类型多：Met-FLAG–Protein，N端FLAG–Protein，C端FLAG-Protein
« 填料质量硬：包被高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体，浓度>7.5g抗体/L凝胶
« 性价比更高：进口一半的价格，一年节省50%科研经费
2产品原理
Anti-Flag亲和纯化凝胶的核心原理为亲和纯化技术：利用生物分子之间的特异性结合的作用进行生物物质的分离纯化，将鼠源IgG2b单克隆抗体与4%高度交联的琼脂糖凝胶通过供价偶联制备形成特异性吸附Flag蛋白序列的亲和吸附剂，将带有Flag标签的目的蛋白吸附到吸附剂上，然后选择合适的洗脱液将目的蛋白从吸附剂上解吸。具体流程图如下：
图1 Anti-Flag亲和纯化凝胶实验流程图
3产品优势
1）超高纯化效率
本产品具有超高的纯化效率，≥1.1mg蛋白/mL凝胶的载量，可满足所有实验要求。
图2 Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶质检数据
Line 1：翊圣Flag-gel与E. coli裂解液混合纯化后电泳；Line 2：阴性对照
2）PK进口品牌S*M2 Flag-gel
高品质，高质量，与进口产品相比，同样不惧
图3 PK进口品牌S*M2 Flag-gel
Line 1,2: 翊圣Flag-gel, 3×Flag peptide洗脱; Line 3,4: 翊圣Flag-gel, Gly-HCl洗脱; Line 5,6: S*M2 Flag-gel, 3×Flag peptide洗脱; Line 7,8: S*M2 Flag-gel, Gly-HCl洗脱
3）更高性价比
Yeasen致力于为您提供性价比最高的产品，Anti-flag亲和纯化凝胶可为您节约50%科研经费。
图4 Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶产品与S品牌同级别产品价格比较
5常见问题
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
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柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
清洗树脂。 |
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裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤，或离心去除。 |
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样品太黏稠 |
样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5µg/ml），Mg2+(终浓度1mM)，冰上孵育10-15min |
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缓冲液太黏稠 |
有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。 |
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洗脱组分中无目的蛋白 |
Flag标签蛋白变性了 |
使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。 |
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过度的裂解使目的蛋白变性 |
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Flag多肽失效 |
更换Flag多肽 |
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目的蛋白聚集产生沉淀 |
在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10mM |
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融合蛋白改变了Flag的构象，影响了目的蛋白的结合力 |
测定pGEX中Flag的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中Flag有很高的亲和力，有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了Flag标签蛋白的亲和力。 |
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降低结合温度至4℃，充分清洗。 |
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目的蛋白没有完全洗脱下来 |
洗脱体积太少 |
增加洗脱液体积，减小洗脱流速。 |
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洗脱液中Gly-HCl的pH 发生改变 |
使用新鲜配制的洗脱液 |
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洗脱液孵育时间不够 |
增加洗脱液与凝胶的孵育时间 |
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电泳或western blot检测中发现多条带 |
Flag融合蛋白已经发生降解 |
在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF |
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可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT） |
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细胞破碎过度 |
减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1倍10mg/ml溶菌酶，25mM Tris-HCl，pH8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与Flag融合目的蛋白的共纯化。 |
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抗体与E. coli的各种蛋白反应 |
抗体吸附E. coli蛋白：Flag-抗体；超声处理去除Flag抗体，可以用Western Blot检测 |
6订购信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
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Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶） |
20584ES01 |
100 μL |
856.00 |
翌圣生物科技（上海）股份有限公司 商家主页地 址： 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元 联系人： 李自转 电 话： 400-6111-883、021-34615995-8075 传 真： 021-34615995-188 Email：lizizhuan@yeasen.com 相关咨询翌圣Hieff Clone®系列分子克隆试剂盒（累计影响因子1300+） (2024-11-21T00:00 浏览数:3955) YeaRed/YeaGreen无毒核酸染料，您的安全科研助手 (2024-11-21T00:00 浏览数:2596) 线粒体探针应用 - 罗丹明123（Rh 123） (2024-11-21T00:00 浏览数:1450) 阿尔玛蓝（Alamar Blue）在细胞增殖中的应用 (2024-11-21T00:00 浏览数:3012) 磺酰罗丹明 B（SRB）在细胞增殖中的应用 (2024-11-21T00:00 浏览数:3464) PI（Propidium Iodide）碘化丙啶的应用 (2024-11-21T00:00 浏览数:3423) Hoechst 33258/ Hoechst 33342：细胞核染色的重要染料 (2024-11-21T00:00 浏览数:2440) ER-Tracker：探索内质网的利器 (2024-11-21T00:00 浏览数:2323) 细胞核染色 - DAPI染色液 (2024-11-21T00:00 浏览数:2672) 聚焦细胞凋亡，认识Annexin V的价值 (2024-11-21T00:00 浏览数:2733) ADVERTISEMENT
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